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荧光显微镜的基本结构以及成像原理

来源:影睿光学 发布时间:2024-03-15 阅读次数:109
在荧光显微镜紫外光的照射下观察的玻片标本,一种是自发荧光的如叶绿素、血红素等;另一种诱发荧光,是经过荧光染料的染色后,紫外照射发出荧光的。因此,荧光显微镜常与免疫组织化学和切片技术相互结合应用于科研、检验等多个领域。
1、荧光显微镜的成像原理:
(1)首先荧光显微镜使用的光源能够发出强烈的紫外线,经过激发滤色镜,过滤掉一部分光源当中的可见光。
(2)接着通过聚光镜将紫外光聚焦于样品,诱发样品上的荧光物质发射荧光。
(3)最后经过物镜后的阻断滤色镜,阻止所有的紫外线通过,只允许通过诱发的荧光通过。
2、荧光显微镜的不同类型和基本结构
(1)荧光显微镜的两种不同类型:
透射式荧光显微镜,它和普通光学显微镜类似,光源是从镜座出发经过聚光镜到达样品激发荧光后通过物镜,最后到达目镜。
另一种是最常见的落射式显微镜,大部分的荧光显微镜也是采用这种类型。它的光源是通过物镜落到样品上,激发荧光以后再发射回物镜,最后到达目镜。
不论是透射式的荧光显微镜还是落射式的,它们的光源都要经过激发滤色镜过,滤掉一部分的可见光。激发样品发出荧光后,还要经过阻断滤色镜,过滤掉一部分多余的激发光。最终,这使得我们观察到的是荧光物质染色部分所发出的荧光。
(2)荧光显微镜的基本结构:
光源:超高压汞灯(Mercury lampe),可以产生强光照,含有大量的紫外光和蓝紫光。
滤片系统。荧光显微镜也有卤素灯(Halogen)提供自然光源,具有和普通光学显微镜相同的功能。
激发滤色镜(Exciter filter):过滤光源中一部分可见,提供一定波长的激发光。
阻断滤色镜(Emission filter):透过相应波长范围的荧光,阻断或者吸收剩余的激发光。
二向分色镜(Dichroic mirror):透过长波光线和反射短波光线的功能
孔径光阑(Condenser Aperture diaphragm A):孔径光阑是决定显微镜像的分辨力和反差的重要光学部件之一
视场光阑(Field diaphragm F):视场光阑的作用是控制标本照明区域的大小,阻止对于像的形成所不需要的光线进入标本。
激发光转换器:又称镜臂旋转台,旋转台为一个圆盘形的结构,上面有5个定位标志:U、V、B、G分别代表不同的荧光激发方法以及不同的滤色镜组合。
荧光显微镜分为落射式和透射式的,一般市场上常见的是落射式的,透射式是比较老式的了。